LABORATOIRE MIDAC RE20-0701-1Page 2 sur 101PRINCIPEL'activité virucide a été déterminée selon la norme NF EN 14476+A2 : "Antiseptiques et désinfectants chimiques — Essai quantitatif de suspension pour l'évaluation de l'activité virucide dans le domaine médical - Méthode d'essai et prescriptions (Phase 2/Étape 1)" - Juillet 2019.2IDENTIFICATION DE L’ECHANTILLONProduit : Processus global de lavage à froid, Générateur à ozone avec adjonction de produits lessiviel dédiés (Lavage n°7: Lavage épidémie décontamination textile blanc)Numéro de lot : Fabrication extemporanément –date d’expiration:non communiquéFabricant ; s’il est inconnu : fournisseur :GACHES CHIMIE SPECIALITES Date de livraison :17/06/2020Conditions de stockage : température ambiante, à l'abri de la lumière.Diluant du produit recommandé par le fabricant : N/A.Substance(s) active(s) et sa (ou leurs) concentration(s) : Voir Tableau ci-dessousAspect du produit : Test 1 : Liquide incolore Test 2 et 3 : Liquide présentant un léger trouble blanc homogène3 CONDITIONS EXPERIMENTALES Date(s) des essais (période d’analyse) : Du27/08/2020 au 08/09/2020Diluant utilisé pour la solution d’essai du produit (eau dure ou eau distillée) : N/A.Concentrations d’essai du produit:Test 1: ASEPSIS 0,025g/L COOLSTAR 0,025g/L JAVEL 12,5% 0,025g/L GAROSIVE DETER 0,025g/L GAROBOOST 0,025g/L PERACID FORTE 0,025g/L ASEPSIS 0,025g/L Test 2: ASEPSIS 0,25g/L COOLSTAR 1,5g/L JAVEL (12,5%) 5g/L GAROSIVE DETER 1g/L GAROBOOST 1g/L PERACID FORTE 1,5g/L ASEPSIS 0,75g/LTest 3: ASEPSIS 0,25g/L COOLSTAR 1,5g/L JAVEL (12,5%) 6g/L GAROSIVE DETER 1,5g/L GAROBOOST 1,25g/L PERACID FORTE 1,5g/L ASEPSIS 0,75g/LAspect des dilutions du produit :/Température(s) d’essai : 20°C (± 2,5°C).Temps de contact: 7 minutes (+/- 10 secondes).Substance(s) interférente(s): albumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté) Stabilité et aspect du mélange au cours du mode opératoire (noter la formation de tout précipité ou floculat) ; Pas de précipité observé au cours des essais, aucune réaction mise en évidence au cours des essais.Température d’incubation : 37°C (± 1°C) et 5 % CO2. Sous CO25%.Méthode de filtration:microfiltrationColumns: Microspin TMS-400 HR columns Identification de la source de la souche virale et nombre de passages:Parvovirus MurinMode opératoire pour arrêter l’action du produit : Microspin TMS-400 HR columns, selon le protocole du fabricantLignée cellulaire: nom, source, nombre de passages, milieu pour cultures cellulaires : A9 CCL1.4, Source de Cellule, 1, MEM 10%SVF, 1% AANE, 1%ATB, 1%L-Glu LABORATOIRE MIDAC RE20-0701-1Page 3 sur 104METHODE D’ESSAI ET RESULTATS1)Méthode:1 part de substance interférente + 1 part de suspension virale + 8 parts du produit biocide sont mélangés et incubés au temps de contact et à la température définie. L’essai est validé par : -un test de cytotoxicité du produit -un test d’inactivation du produit-un test de sensibilité -un essai de référence d’inactivation du virus avec du formaldéhydeAprès incubation, les titres infectieux sont calculés selon la méthode de Spearman et Kärber. 2)RésultatsTitre de la suspension d’essai : 6,63E+00log DITC50Inactivation maximale détectable du virus6,13E+00log DITC50Inactivation du virus lors de l’essai de référence pour l’inactivation du virus après 60 min :2,38E+00 log DITC50 LABORATOIRE MIDAC RE20-0701-1Page 4 sur 105 RESULTATS EXPERIMENTAUX a) Contrôle de la cytotoxicité du produit Cytotoxicité du produit (log DICT50)Technique par dilution 5,00E-01Filtration sur Microspin TMS-400 HR columns 5,00E-01Interprétation : Après dilution selon le protocole de la norme, la toxicité résiduelle du désinfectant est de 5,00E-01 log DICT50. La technique par filtration sur colonne Microspin TMS-400 HR réduit cette toxicité à 5,00E-01 log DICT50.b) Contrôle de la sensibilité des cellules au produit Sensibilité(log DICT50)Cellules traitées A6,63E+00Cellules non traitées B6,50E+00Interprétation : La différence entre les titres viraux sur cellules traitées (A) et cellules non traitées(B) doit être inférieure à 1 log afin de valider le test. c)Essai de réference pour l’inactivation du virusProduitConcentrations dans l’essaiSubstance interférenteTitre viral (log DICT50)Reduction(log DICT50)Formaldehyde–30min0.7%(v/v)PBS3,63E+002,00E+00Formaldehyde -60min0.7%(v/v)PBS3,25E+002,38E+00Témoin viral formaldéhyden.aPBS5,63E+00Interprétation : La différence entre le titre du témoin viral, exprimé en logarithme, et celui du microorganisme d’essai utilisé lors de l’essai de référence pour l’inactivation du virus est de 2,00E+00 après 30 min et de 2,38E+00aprés 60min LABORATOIRE MIDAC RE20-0701-1Page 5 sur 10d)Contrôle de l’efficacitéde l’arrêt du produitProduitConcentrations dans l’essaiSubstance interférente (log DICT50)Reduction(log DICT50)Neutralisation du produitTest 3 albumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté).6,88E+000,00E+00Contrôle de neutralisationn.aalbumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté).6,88E+00Interprétation:Lors du contrôle de l’efficacité de l’arrêt de l’activité du produit, la différence de titre avec la suspension d’essai doit être ≤ 0.5 lg.e)Evaluation de l’activité virucideProduitConcentrations dans l’essaiSubstance interférente (log DICT50)Reduction(log DICT50)Lavage n°7: Lavage épidémie décontaminationtextile blanc:/Test 1 albumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté).4,00E+002,63E+00Test 2 5,00E-016,13E+00Test 3 5,00E-016,13E+00Viral control T0 6,38E+00Viral control Tmax6,63E+00Interprétation:Une concentration au moins par essai doit montrer une réduction de 4lg ou plus, et une concentration au moins doit montrer une réduction logarithmique inférieur à 4. LABORATOIRE MIDAC RE20-0701-1Page 6 sur 106 VERIFICATION DE LA METHODOLOGIE Un essai n’est valable que si les critères suivants sont remplis:a/ le titre de la suspension d’essai d’au moins 1 x 10^8 DICT50/ml est suffisamment élevé pour permettre une réduction du titre d’au moins 4 lg afin de vérifier la méthode: la réduction de titre détectable doit être d’au moins 4 lgb/ la différence entre le titre du témoin viral, exprimé en logarithme, et le titre du virus dans l'essai d'inactivation de référence est comprise: entre –0,5 et –2,5 après 30 min et entre –2 et –4,5 après 60 min pour le poliovirus entre –3 et –5 après 30 min et entre –3,5 et –5,5 après 60 min pour l'adénovirus entre –1 et –3 après 30 min et entre –2 et –4 après 60 min pour le norovirus murin entre 0,0 et –2,0 après 30 min et entre –0,5 et –2,5 après 60 min pour le parvovirus entre –0,75 et –3,5 après 5 min et entre –2,0 et ≥ –4,0 après 15 min pour le virus de la vaccine c/ la cytotoxicité de la solution d’essai du produit n’affecte pas la morphologie et la croissance cellulaires ni la sensibilité au microorganisme d’essai dans les dilutions des mélanges d’essai qui sont nécessaires pour démontrer une réduction de 4 lg du titre viral d/ le titrage comparatif du virus sur les cultures cellulaires traitées avec des dilutions du mélange d’essai et en parallèle (c’est-à-dire ajout du tampon PBS uniquement) a pour résultat une différence < 1 lg du titre viral; e/ lors du contrôle de l’efficacité de l’arrêt de l’activité du produit), la différence de titre avec la suspension d’essai doit être ≤0,5 lg ;f/ une concentration au moins par essai doit montrer une réduction de 4 lg ou plus, et une concentration au moins doit montrer une réduction logarithmique inférieure à 4 7CONCLUSIONSelon la norme NF EN 14476+A2, le produit Lavage n°7: Lavage épidémie blanc lot : /présente une activité virucide à la concentration du Test 2 en 7 minutes (+/- 10 secondes) à20°C (± 2,5°C) au contact de albumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté),vis-à-vis de la souche: Parvovirus Murin LABORATOIRE MIDAC RE20-0701-1Page 7 sur 10Annexe: Données brutes Produit: Lavage n°7: Lavage épidémie décontamination textileblanclot : /ProduitConcentrationSubstance interférenteTemps de contact10-110-210-310-410-510-610-710-8Lavage n°7: Lavage épidémie décontamination textile blanc Test 3albumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté)n.a0000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000Lavage n°7: Lavage épidémie décontamination textile blancMicrospinTest 3albumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté)n.a0000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000Sensibilité des cellules TraitéTest 3albumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté)60min4444444422222222222222222222222211111111110111111000010000000000Sensibilitédes cellules Non traité n.aPBS60min4444444433333333222222221111111111111111101011110110000000000000Formaldehyde 30 min 0,7 % (v/v) PBS30min1111111111111111111111110000001000000000000000000000000000000000Formaldehyde 60min 0,7 % (v/v)PBS60min2222222211111111111001110000000000000000000000000000000000000000Formaldehyde control n.aPBS60min1111111111111111111111111111111111101111101000000000000000000000Cytotoxicité formaldéhyde0.7%(v/v)PBSn.a0000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000Viral control n.aalbumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté)04444444433333333222222222222222211111111100110010100100100000000 LABORATOIRE MIDAC RE20-0701-1Page 8 sur 10Viral controln.aalbumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté)7 minutes (+/- 10 secondes).4444444422222222112222221111111111111111111110111000010000000000Lavage n°7: Lavage épidémiedécontamination textile blancTest 1albumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté)7 minutes (+/- 10 secondes).3333333311111111111111111011000010000000000000000000000000000000Test 2albumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté)7 minutes (+/- 10 secondes).0000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000Test 3albumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté)7 minutes (+/- 10 secondes).0000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000InactivationTest 3albumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté)30min4444444422222222222222222222222221111111111111110110000100000000Inactivation controln.aalbumine bovine 3 g/L avec érythrocytes de mouton 3 mL/L (conditions de saleté)30min44444444333333332222222211111111111111111111111101100001000000001à 4 Virus présents. 1= 25% ECP et 4 = 100% ECP 0 Absence de virus n.a non applicable T: Toxique LABORATOIRE MIDAC RE20-0701-1Page 9 sur 10Annexe : Présentation graphique des résultats de l’essaia) Essai de réference pour l’inactivation du virusb)Evaluation de l’activité virucide du produit6,630,5012345670 min7minlg DICT50Contact time Cytotoxicité du produitInactivation du virus5,633,633,250123456030min60minlg DICT50Contact timeInactivation du virus par0,7%(v/v) formaldehydeCytotoxicité du produit 0,7% (v/v) formaldehyde LABORATOIRE MIDAC RE20-0701-1Page 10 sur 10RÉVISIONSDateNature de la modification Versionn.a.n.a.n.a.
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